“好馬配好鞍” ，如何給LC-MS儀器選六氟異丙醇
更新時間：2025-12-25 瀏覽次數：179
六氟異丙醇是LC-MS儀器分析中的“多面手"，它通過獨特的物理和化學性質，可以大大改善液相色譜的分離效果和質譜的電離效率，尤其在對強極性化合物、堿性化合物（比如：多肽、蛋白質、胺類藥物等）的分析中表現尤為突出。
1. 改善色譜峰形，作為離子對試劑和硅醇基掩蔽劑，可顯著改善堿性化合物的峰拖尾問題，提高分離度和重現性。
對于含有堿性基團（如：氨基化合物），它們容易與色譜柱固定相發生強烈的相互作用，導致峰形拖尾、保留時間不穩定等問題。此時，六氟異丙醇可作為強離子對試劑和掩蔽劑。
六氟異丙醇的氟原子具有強吸電子效應，使其羥基（-OH）的酸性非常強（pKa ~9.3），容易解離，解離后的陰離子可以與帶正電的分析物（如：質子化的胺類）形成疏水性的離子對；六氟異丙醇本身能與固定相表面的硅醇基結合，形成一層“保護層"，阻止分析物與硅醇基發生不必要的相互作用。
2. 增強質譜檢測器的信號，促進去溶劑化和質子化，提高ESI+模式下的電離效率和響應強度，抑制加合物形成。
促進去溶劑化：六氟異丙醇具有較低的沸點，在電噴霧的液滴蒸發過程中更容易揮發，有助于加速液滴分裂和離子從液滴中釋放出來，從而提高電離效率；促進質子化：六氟異丙醇的酸性使其容易為溶液提供質子（H?），促進分析物的質子化過程，從而增強正離子模式下的信號；抑制鈉加合物形成：對于一些化合物，容易形成[M+Na]?等加合離子，導致信號分散。六氟異丙醇可以通過其獨特的相互作用，抑制這些加合物的形成，提高信噪比。
3. 作為緩沖鹽或添加劑，可替代傳統的具有揮發性的緩沖鹽。
與傳統緩沖鹽（如：磷酸鹽）不同，六氟異丙醇及其常見的配對陽離子（如：三乙胺、二異丙基乙胺等）都具有高揮發性，這意味著它們不會在離子源內結晶沉積，避免質譜儀器的污染和信號抑制，非常適合于LC-MS儀器分析。
4. 在蛋白質組學、多肽分析中的應用優勢。
分析酶解后的多肽混合物通常帶有多個堿性氨基酸（如：精氨酸、賴氨酸等），建議可通過反相色譜的流動相中添加少量的六氟異丙醇，通常與三乙胺或甲酸銨配對，如： 0.1% 三乙胺 + 0.1% 六氟異丙醇），可以極大改善多肽分析的峰形和分離度，提高質譜檢測的靈敏度，目前這種組合已成為蛋白質組學中一種非常常見的流動相添加劑。
配制濃度：
通常使用濃度較低，在5-20 mM（約0.1% v/v）范圍內，過高濃度可能抑制電離或損壞色譜柱（尤其是硅膠基質）。
實驗室安全防護：
具有毒性和刺激性，對眼睛、皮膚和呼吸道有危害毒性，使用時需在通風櫥內操作，并需妥善處理廢液。
色譜柱兼容性的要求：
對大多數反相C18柱兼容，但長期使用可能對某些類型的色譜柱的使用壽命會有影響。
pH值：
六氟異丙醇的加入會降低流動相的pH值，需綜合考慮其對化合物保留作用的影響。
1. 首先，選擇高純度的試劑
LC-MS是一種高靈敏度的分析技術，流動相中的任何雜質都會直接進入離子源，產生高背景噪音、基線抬升、甚至掩蓋目標分析物的信號。建議選擇LC-MS級六氟異丙醇，普通分析純或合成級的六氟異丙醇含有大量的雜質，如：非揮發性雜質會在離子源內不斷積累和碳化，污染離子源、毛細管、錐孔等部件，導致靈敏度持續下降，需要頻繁清洗和維護；有機雜質：有機污染物會產生額外的色譜峰和背景離子，干擾目標化合物的定性和定量；金屬離子雜質：金屬離子污染會與分析物形成加合物，導致信號分散、靈敏度降低，并增加譜圖的復雜性。
2. 同時，建議選擇高純度的配對試劑
六氟異丙醇通常不單獨使用，而是與一種揮發性堿配對形成緩沖體系，常用的是三乙胺、二異丙基乙胺等。由于六氟異丙醇是酸性的（pKa ~9.3），單獨使用會使流動相pH過低。加入揮發性堿可以調節pH值，優化分離選擇性，它們共同作用是六氟異丙醇的陰離子與分析物的陽離子形成離子對，而有機堿的陽離子則與固定相硅醇基結合，共同實現改善峰形的效果。建議配對試劑也選用LC-MS級試劑，如：LC-MS級三乙胺等。
3. 最后，需考慮溶劑兼容性的要求
六氟異丙醇需要與LC-MS流動相的其他組分兼容。水相：六氟異丙醇與水互溶，可以方便地加入到水相流動相（如：水/乙腈或水/甲醇體系）中；有機相：它也與乙腈（ACN）、甲醇（MeOH）等常用有機溶劑互溶。
LiChropur™ LC-MS級六氟異丙醇的CoA分析質量證書舉例如下：
LiChropur™系列熱賣產品
貨號 | 產品名 |
18127 | 六氟異丙醇 |
73594 | 乙酸銨 |
70221 | 甲酸銨 |
- (上一篇)：默克快速測試盒常見問題及解決辦法
- (下一篇)：應用速遞 | 攻克海水/高氯樣品中的COD檢測難題
